甲(jia)狀旁腺素（PTH）ELISA 試劑(ji)盒(he)

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甲(jia)狀旁腺素（PTH）ELISA 試劑(ji)盒(he)

應用於(yu)ELISA

親和(he)素(su)是(shi)壹(yi)種(zhong)糖(tang)蛋白，可由(you)蛋清(qing)中提取(qu)。分子(zi)量(liang)60kD，每個(ge)分子(zi)由(you)4個亞(ya)基(ji)組成(cheng)，可以和(he)4個(ge)生(sheng)物(wu)素分子(zi)親密(mi)結(jie)合(he)。維(wei)生素(su)H，分(fen)子(zi)量(liang)244.31，存在於(yu)蛋黃(huang)中。用化(hua)學(xue)方(fang)法制成(cheng)的衍生物，生(sheng)物(wu)素(su)－羥(qiang)基(ji)琥(hu)珀(po)亞(ya)胺(an)酯(zhi)（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與(yu)蛋白質、糖(tang)類(lei)和(he)酶(mei)等多(duo)種(zhong)類(lei)型(xing)的大小分子(zi)形(xing)成(cheng)生(sheng)物(wu)素化(hua)的產物。親和(he)素(su)與(yu)生(sheng)物素的結合，雖不(bu)屬(shu)免(mian)疫反(fan)應，但特(te)異性(xing)強，親和(he)力(li)大(da)，兩(liang)者(zhe)壹(yi)經(jing)結(jie)合(he)就(jiu)極為(wei)穩(wen)定。由(you)於(yu)1個親和(he)素(su)分(fen)子(zi)有4個(ge)生(sheng)物素(su)分子的結合位置(zhi)，可以連接更(geng)多的生物素化(hua)的分子，形成(cheng)壹(yi)種(zhong)類(lei)似(si)晶(jing)格(ge)的復合(he)體(ti)。因此把親和(he)素(su)和(he)生(sheng)物(wu)素(su)與ELISA偶聯起(qi)來(lai)，就(jiu)可大(da)提高ELISA的敏感(gan)度。

親和(he)素(su)－生(sheng)物(wu)素系(xi)統(tong)在ELISA中的應用有多(duo)種(zhong)形(xing)式(shi)，可用(yong)於(yu)間接包被(bei)，亦(yi)可用(yong)於(yu)終反(fan)應放大。可以在固相(xiang)上(shang)先(xian)預(yu)包被(bei)親和(he)素(su)，原(yuan)用吸附法包被(bei)固相(xiang)的抗體(ti)或(huo)抗原(yuan)與生(sheng)物(wu)素(su)結合(he)，通過(guo)親和(he)素(su)－生(sheng)物(wu)素反(fan)應而使(shi)生(sheng)物(wu)素(su)化(hua)的抗體(ti)或(huo)抗在相(xiang)化(hua)。這(zhe)種(zhong)包被(bei)法不(bu)僅(jin)可增加吸附的抗體(ti)或(huo)抗原(yuan)量(liang)，而且(qie)使其(qi)結(jie)合點(dian)充分(fen)暴露。另(ling)外(wai)，在常(chang)規ELISA中的酶(mei)標(biao)抗體(ti)也(ye)可用(yong)生物(wu)素化(hua)的抗體(ti)替代(dai)，然後連接親和(he)素(su)－酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)，以放大反(fan)應信號(hao)。

甲(jia)狀(zhuang)旁腺素（PTH）ELISA 試劑(ji)盒(he)

定性(xing)測定
　　　定性(xing)測定的結果(guo)判斷是對受(shou)檢標本中是否(fou)含有待測抗原(yuan)或(huo)抗體(ti)作出(chu)"有"或(huo)"無(wu)"的簡單回答(da)，分(fen)別(bie)用"陽性(xing)"、"陰性(xing)"表示(shi)。"陽性(xing)"表示(shi)該標本在該測定系(xi)統(tong)中有反(fan)應。"陰性(xing)"則為(wei)無(wu)反(fan)應。用定性(xing)判斷法也(ye)可得(de)到(dao)半(ban)定量(liang)結果(guo)，即用滴(di)度來(lai)表示(shi)反(fan)應的強度，其(qi)實(shi)質仍是(shi)壹(yi)個定性(xing)試驗(yan)。在這種(zhong)半(ban)定量(liang)測定中，將標(biao)本作壹(yi)系(xi)列稀(xi)釋(shi)後進行試驗(yan)，呈陽性(xing)反(fan)應的高稀(xi)釋(shi)度即為(wei)滴(di)度。根(gen)據(ju)滴(di)度的高低，可以判斷標本反(fan)應性(xing)的強弱，這比(bi)觀(guan)察(cha)不(bu)稀(xi)釋(shi)標(biao)本呈色的深淺(qian)判斷為(wei)強(qiang)陽性(xing)、弱陽性(xing)更(geng)具(ju)定量(liang)意(yi)義(yi)。

在間接法和(he)夾(jia)心法ELISA中，陽性(xing)孔呈色深(shen)於(yu)陰性(xing)孔。在競(jing)爭(zheng)法ELISA中則相(xiang)反(fan)，陰性(xing)孔呈色深(shen)於(yu)陽性(xing)孔。

操作程(cheng)序(xu)

1.   分(fen)別設空白孔（空白對照(zhao)孔不(bu)加樣(yang)品及酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)，其(qi)余(yu)各步(bu)操作相(xiang)同(tong)）、標準品孔、待測樣(yang)品(pin)孔。在酶(mei)標(biao)包被(bei)板(ban)上(shang)標準品孔中加入(ru)標(biao)準品50μl；在酶(mei)標(biao)包被(bei)板(ban)上(shang)待測樣(yang)品(pin)孔中先(xian)加樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然後再加待測樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品zui終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為(wei)5倍）。每孔加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空白孔除(chu)外(wai)。輕輕晃動混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)60分(fen)鐘。

2.   棄(qi)去液(ye)體，甩(shuai)幹(gan)，每孔加(jia)滿稀(xi)釋(shi)後洗滌液(ye)，振蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌液，用(yong)吸水紙拍幹(gan)。如(ru)此重復5次(ci)，拍幹(gan)。

3.   每(mei)孔先(xian)加入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕震蕩混勻(yun)，37℃避(bi)光顯(xian)色15分(fen)鐘.

4.   取(qu)出(chu)酶(mei)標(biao)板(ban)，每孔加(jia)終止液50μl，終(zhong)止反(fan)應（此時藍(lan)色(se)立(li)轉黃色(se)）。

5.   測定：以空白孔調零，在450nm波(bo)長(chang)下(xia)測量(liang)各孔的吸光度值(zhi)（OD值(zhi)）。 測定應在加終(zhong)止液後15分(fen)鐘以內進行。

6.   根(gen)據(ju)標(biao)準品的濃度及對應的OD值(zhi)計算出(chu)標(biao)準曲(qu)線(xian)的直線(xian)回歸方(fang)程(cheng)，再根(gen)據(ju)樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)在回歸方(fang)程(cheng)上(shang)計算出(chu)對應的樣品濃度。也(ye)可以使用(yong)各種(zhong)應用軟件(jian)來(lai)計(ji)算。應記住由(you)於(yu)樣品稀(xi)釋(shi)了(le)的，其(qi)實(shi)際濃度應該乘(cheng)以總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數。