環(huan)磷(lin)酸腺苷(gan)（cAMP） ELISA 試(shi)劑(ji)盒

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環磷(lin)酸腺苷(gan)（cAMP） ELISA 試(shi)劑(ji)盒

工(gong)作原(yuan)理(li)

本試(shi)劑(ji)盒采(cai)用雙(shuang)位(wei)點夾心(xin)酶(mei)聯(lian)免疫吸附(fu)法（ELISA），測(ce)定樣(yang)品中(zhong)的水(shui)平(ping)。向預先(xian)包被抗體(ti)的(de)酶(mei)標(biao)孔(kong)中(zhong)加入(ru)標(biao)準品、待測(ce)樣(yang)本和HRP標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)體(ti)，經過溫育(yu)和洗滌(di)，去(qu)除未(wei)結合(he)的(de)組(zu)分(fen)，然後再(zai)加入(ru)底(di)物(wu)A、B，產生藍(lan)色，並(bing)在酸的作(zuo)用下轉化(hua)成(cheng)終的(de)黃色(se)。顏(yan)色的(de)深(shen)淺(qian)與(yu)樣(yang)品中(zhong)的濃度(du)呈正(zheng)相關。

環(huan)磷(lin)酸腺苷(gan)（cAMP） ELISA 試(shi)劑(ji)盒

註(zhu)：標準品用(yong)標(biao)準品稀(xi)釋(shi)液依次稀釋(shi)為(wei)：100、50、25、12.5、6.25、0 pg/ml

需要(yao)而(er)未(wei)提供的(de)試(shi)劑(ji)和器材

1.   37℃恒(heng)溫箱(xiang)。

2.   標(biao)準規格(ge)酶標(biao)儀。

3.   精(jing)密移液器及壹次性吸頭

4.   蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，

5.   壹次性試(shi)管(guan)

6.   吸(xi)水(shui)紙

註(zhu)意事(shi)項

1.   從(cong)2-8℃取(qu)出(chu)的(de)試(shi)劑(ji)盒，在(zai)開(kai)啟(qi)試(shi)劑(ji)盒之(zhi)前(qian)要(yao)室(shi)溫平(ping)衡至(zhi)少(shao)30分(fen)鐘。酶(mei)標(biao)包被板開(kai)封(feng)後如未(wei)用(yong)完，板條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入(ru)密封袋中(zhong)保存(cun)。

2.   各(ge)步加樣(yang)均(jun)應(ying)使(shi)用加樣(yang)器，並(bing)經常校(xiao)對(dui)其準確(que)性，以(yi)避免試(shi)驗(yan)誤(wu)差(cha)

3.   建(jian)議(yi)所(suo)有標(biao)準品、樣(yang)本都(dou)做雙(shuang)份檢測(ce)。

4.   嚴(yan)格(ge)按(an)照說(shuo)明(ming)書的(de)操作(zuo)進行，試(shi)驗(yan)結果判定必須以(yi)酶標(biao)儀讀數為(wei)準.

5.   為(wei)避(bi)免交叉汙染(ran)，要(yao)避(bi)免重復(fu)使(shi)用手中(zhong)的吸(xi)頭和封板膜(mo)。

6.   不(bu)用(yong)的其它(ta)試(shi)劑(ji)應包裝好或(huo)蓋(gai)好(hao)。不(bu)同(tong)批號的試(shi)劑(ji)不(bu)要(yao)混用。保(bao)質(zhi)前(qian)使(shi)用。

7.   底(di)物(wu)B對(dui)光(guang)敏感(gan)，避(bi)免長時(shi)間暴(bao)露(lu)於光(guang)下。

洗(xi)板方(fang)法(fa)

手(shou)工(gong)洗板方(fang)法(fa)：甩(shuai)掉(diao)酶(mei)標板內(nei)的(de)液體(ti)；在(zai)實驗臺(tai)上鋪墊(dian)幾(ji)層(ceng)吸(xi)水(shui)紙，酶(mei)標(biao)板朝(chao)下用力拍(pai)幾(ji)次(ci)；將稀(xi)釋(shi)後的洗滌(di)液至少0.35ml註(zhu)入(ru)孔(kong)內，浸泡(pao)1-2分(fen)鐘。根據(ju)需要(yao)，重復(fu)此(ci)過程(cheng)數次(ci)。

自(zi)動(dong)洗板：如果有自(zi)動(dong)洗板機，應(ying)在熟練(lian)使(shi)用後再(zai)用到正式(shi)實驗過程(cheng)中(zhong)

標(biao)本要(yao)求

1．不(bu)能(neng)檢測含(han)NaN3的(de)樣(yang)品，因(yin)NaN3抑(yi)制(zhi)辣(la)根過氧(yang)化物(wu)酶(mei)的（HRP）活(huo)性(xing)。

2．標(biao)本采(cai)集後盡早(zao)進(jin)行提取，提取按(an)相關文(wen)獻進(jin)行，提取後應盡快(kuai)進(jin)行實驗。若不(bu)能(neng)馬上進行試(shi)驗(yan)，可將標(biao)本放於-20℃保(bao)存(cun)，但應避免反(fan)復凍(dong)融

操作(zuo)程(cheng)序

1.   分(fen)別設(she)空白孔(kong)（空白對(dui)照(zhao)孔(kong)不(bu)加樣(yang)品及酶標(biao)試(shi)劑(ji)，其余(yu)各(ge)步操作(zuo)相同(tong)）、標準品孔(kong)、待測(ce)樣(yang)品孔(kong)。在酶(mei)標包被板上標準品孔(kong)中(zhong)加入(ru)標(biao)準品50μl；在(zai)酶(mei)標(biao)包被板上待測(ce)樣(yang)品孔(kong)中(zhong)先(xian)加樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液40μl，然(ran)後再(zai)加待測(ce)樣(yang)品10μl（樣(yang)品zui終(zhong)稀(xi)釋度為5倍）。每孔(kong)加入(ru)酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空白孔(kong)除外。輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)混勻，37℃溫育(yu)60分(fen)鐘。

2.   棄(qi)去(qu)液體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每孔(kong)加滿(man)稀釋後洗滌(di)液，振蕩30秒(miao)，甩去(qu)洗滌(di)液，用吸水紙拍(pai)幹(gan)。如此(ci)重復(fu)5次(ci)，拍(pai)幹(gan)。

3.   每(mei)孔(kong)先(xian)加入(ru)顯(xian)色劑(ji)A50μl，再(zai)加入(ru)顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)15分(fen)鐘.

4.   取(qu)出(chu)酶(mei)標(biao)板，每(mei)孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應（此(ci)時(shi)藍(lan)色立(li)轉黃(huang)色(se)）。

5.   測(ce)定：以(yi)空白孔(kong)調零(ling)，在(zai)450nm波(bo)長下測量各(ge)孔(kong)的吸(xi)光度值(zhi)（OD值(zhi)）。 測(ce)定應在(zai)加終(zhong)止(zhi)液後15分(fen)鐘以(yi)內進(jin)行。

6.   根據(ju)標(biao)準品的(de)濃度(du)及對應(ying)的(de)OD值(zhi)計(ji)算(suan)出標(biao)準曲線的(de)直線回(hui)歸(gui)方程(cheng)，再(zai)根據(ju)樣(yang)品的(de)OD值(zhi)在(zai)回(hui)歸方程(cheng)上計算(suan)出對(dui)應(ying)的(de)樣(yang)品濃度(du)。也可以(yi)使(shi)用各(ge)種應用(yong)軟(ruan)件(jian)來計(ji)算(suan)。應記(ji)住(zhu)由(you)於樣(yang)品稀(xi)釋(shi)了的，其實際濃度(du)應(ying)該(gai)乘以(yi)總稀(xi)釋倍數。