上(shang)海萊嵐(lan)教您基(ji)因擴增PCR儀的使(shi)用(yong)方法(fa)

基(ji)因擴增PCR儀的使(shi)用(yong)方法(fa)：

PCR由變性--退(tui)火（復(fu)性）--延(yan)伸(shen)三(san)個基(ji)本反(fan)應(ying)步驟(zhou)構(gou)成(cheng)：

①模(mo)板(ban)DNA的變性：模(mo)板(ban)DNA經加熱至(zhi)90~95℃壹(yi)定(ding)時(shi)間(jian)後，使(shi)模板(ban)DNA雙鏈(lian)或經(jing)PCR擴增形(xing)成的雙(shuang)鏈(lian)DNA解離(li)，使(shi)之(zhi)成(cheng)為(wei)單鏈(lian)，以便(bian)它與(yu)引(yin)物結合(he)，為(wei)下(xia)輪反(fan)應(ying)作準(zhun)備；

②模(mo)板(ban)DNA與(yu)引(yin)物的(de)退(tui)火（復(fu)性）：模(mo)板(ban)DNA經加熱變性成(cheng)單(dan)鏈(lian)後，溫度(du)降(jiang)至(zhi)55~60℃，引物與(yu)模(mo)板(ban)DNA單鏈(lian)的互(hu)補(bu)序(xu)列(lie)配(pei)對(dui)結合(he)；

③引(yin)物的(de)延伸(shen)：DNA模(mo)板(ban)--引物結合(he)物在(zai)DNA聚合(he)酶的作用(yong)下(xia)，於70~75℃，以dNTP為反(fan)應(ying)原料(liao)，靶(ba)序(xu)列(lie)為(wei)模(mo)板(ban)，按堿(jian)基(ji)配(pei)對(dui)與(yu)半保(bao)留(liu)復(fu)制(zhi)原理(li)，合成(cheng)壹(yi)條(tiao)新(xin)的(de)與(yu)模(mo)板(ban)DNA鏈(lian)互(hu)補(bu)的半保(bao)留(liu)復(fu)制(zhi)鏈(lian)重復(fu)循環變性--退(tui)火--延伸(shen)三(san)過程(cheng)，就(jiu)可(ke)獲(huo)得更(geng)多(duo)的(de)“半保(bao)留(liu)復(fu)制(zhi)鏈(lian)”，而(er)且這(zhe)種(zhong)新(xin)鏈(lian)又(you)可(ke)成為(wei)下(xia)次(ci)循環的模(mo)板(ban)。每完成壹(yi)個循環需(xu)2～4分(fen)鐘(zhong)，2～3小時(shi)就(jiu)能(neng)將待擴目(mu)的(de)基(ji)因擴增放大(da)幾(ji)百萬倍。