快速掌(zhang)握PCR儀的使(shi)用秘籍(ji)

　　PCR儀利用DNA聚(ju)合(he)酶對特(te)定(ding)基(ji)因做(zuo)體外或(huo)試(shi)管(guan)內In Vitro的大量(liang)合(he)成，基(ji)本(ben)上(shang)它(ta)是利用DNA聚(ju)合(he)酶進(jin)行(xing)專壹性的連(lian)鎖(suo)復制。目(mu)前常用的技術(shu)，可(ke)以將壹段基因復(fu)制為原來的壹百億至壹千億倍(bei)。
 

　　PCR儀的操作規(gui)程(cheng)：
 

　　過(guo)去標(biao)準(zhun)的PCR操作程(cheng)序是將PCR儀必需(xu)反應成份分別(bie)加入壹微量(liang)離(li)心管(guan)中，然後(hou)置(zhi)於(yu)壹定(ding)的循環參數(shu)條件(jian)下進(jin)行循環擴(kuo)增。具(ju)體(ti)如(ru)下：
 

　　(1)向壹微量(liang)離(li)心管(guan)中依(yi)次(ci)加入
 

　　DNA模(mo)板　　　　　　 102-105拷(kao)貝(bei)
 

　　引物(wu)　　　　　　　　　 各(ge)1μmol/L
 

　　dNTP　 　　　　　 各(ge)200μmol/L
 

　　10×PCR緩(huan)沖(chong)液　　1/10體(ti)積(ji)
 

　　ddH2O　　　　　補到(dao)終體積(ji)(終體(ti)積(ji)50μl-100μl)
 

　　混勻(yun)後(hou)，離(li)心15s使(shi)反應成分(fen)集(ji)於(yu)管(guan)底。以上(shang)步驟(zhou)僅(jin)在實(shi)驗(yan)研究(jiu)用，現(xian)在商品(pin)化(hua)試劑已將dNTP、10×PCR緩沖(chong)液，引物(wu)，ddH2O混合(he)在壹起，反應體(ti)積(ji)為20-25μl，只要試(shi)驗(yan)人員加入處理好(hao)的樣品(pin)就(jiu)可(ke)以了(le)。
 

　　(2)加(jia)石蠟油50-100μl於(yu)反應液(ye)表(biao)面(mian)以防蒸(zheng)發(fa)。置(zhi)反應管(guan)於(yu)97℃變性(xing)10min。
 

　　(3)冷(leng)至延(yan)伸溫(wen)度時(shi)，加入1-5u Taq DNA聚合(he)酶，離(li)心30s使(shi)酶和反應液(ye)充(chong)分混合(he)。現(xian)在臨床(chuang)使(shi)用試(shi)劑酶通(tong)常已加(jia)入反應液(ye)中(zhong)。
 

　　(4)PCR儀的循環程(cheng)序為：94℃變性(xing)30s，55℃退火20s，然後(hou)在(zai)72℃延(yan)伸30s，共(gong)循環(huan)30-35次(ci)。然後(hou)壹次(ci)循環結(jie)束後，再將反應管(guan)置(zhi)72℃溫(wen)育5min，以確(que)保充(chong)分(fen)延(yan)伸。