PCR儀工作(zuo)原(yuan)理(li)利用(yong)升溫(wen)使(shi)DNA變(bian)性,在(zai)聚(ju)合酶(mei)的(de)作用(yong)下(xia)使(shi)單(dan)鏈(lian)復制(zhi)成(cheng)雙(shuang)鏈,進(jin)而(er)達(da)到基因復(fu)制(zhi)的(de)目的。
PCR的(de)反(fan)應(ying)包(bao)括三(san)個主要(yao)步驟(zhou)
分別(bie)是(shi)1. Denaturation 2. Annealing of primers,3. Extension of primers。 所謂(wei) Denaturing乃是(shi)將DNA加熱(re)(至90~95℃)變(bian)性, 將雙(shuang)股(gu)的DNA加(jia)熱(re)後轉(zhuan)為單(dan)股(gu)DNA以做(zuo)為復制(zhi)的模板. 而(er)Annealing 則(ze)是(shi)令 Primers於(yu)壹定的溫(wen)度(du)下(xia)(冷(leng)卻(que)至55~60℃)附著於模板DNA兩(liang)端(duan)。 zui後在(zai)DNA聚(ju)合酶(mei)e.g. Taq-polymerase 的(de)作用(yong)下(xia)(加(jia)熱(re)至70~75℃)進(jin)行(xing)引(yin)物的延長 Extension of primers及另壹股(gu)的合(he)成(cheng)。
PCR的(de)zui早設(she)想(xiang)核(he)酸(suan)研(yan)究(jiu)已(yi)有(you)100多年的歷(li)史(shi),二十世(shi)紀60年代末、70年代初(chu)人們致力(li)於(yu)研(yan)究(jiu)基因的(de)體(ti)外(wai)分離(li)技術(shu),Korana於(yu)1971年zui早提(ti)出(chu)核(he)酸(suan)體外(wai)擴(kuo)增(zeng)的(de)設(she)想(xiang):“經過DNA變(bian)性,與合(he)適的引(yin)物雜交,用(yong)DNA聚合酶(mei)延伸(shen)引物,並不斷(duan)重(zhong)復(fu)該過程便(bian)可(ke)克隆(long)tRNA基因”。